Topmusicanswers
- Kokios problemos gali kilti dėl PGR amplifikacijos?
- Kodėl PGR nėra amplifikacijos??
- Kas sukelia amplifikaciją PGR?
- Kas sukelia PGR gedimą?
Kokios problemos gali kilti dėl PGR amplifikacijos?
Daugelis įprastų PGR ir RT-PGR problemų nustatomos reakcijos produktų agarozės gelio elektroforezės metu. Tai apima tikėtino amplifikacijos produkto nebuvimą, nespecifinių produktų buvimą, pernelyg didelį sutepimą ir „pradmenų dimerio“ juostos buvimą.
Kodėl PGR nėra amplifikacijos??
DNR polimerazės fermentas neveikia
DNR polimerazės fermentas yra atsakingas už surištų pradmenų išplėtimą išilgai šablono DNR grandinių. Jei šis fermentas nebėra toks efektyvus, galbūt dėl užšalimo-atšildymo, tada pratęsimo žingsnis PGR reakcijos metu bus neišsamus, todėl PGR produktas jums nebus suteiktas.
Kas sukelia amplifikaciją PGR?
Pagrindinis PGR. PGR procesas iš pradžių buvo sukurtas siekiant sustiprinti trumpus ilgesnės DNR molekulės segmentus (Saiki ir kt. 1985). Į tipinę amplifikacijos reakciją įeina tikslinė DNR, termostabili DNR polimerazė, du oligonukleotidiniai pradmenys, deoksinukleotidų trifosfatai (dNTP), reakcijos buferis ir magnis.
Kas sukelia PGR gedimą?
Paprastai pirmas dalykas, kurį mokslininkai daro, yra kaltas dėl sugedusio fermento ar reagento, kai eksperimentas nepavyksta, tačiau naudojant PGR tai iš tikrųjų yra mažesnė nesėkmės priežastis. Dažniau priežastis yra gilesnės vidinės problemos, tokios kaip grunto dizainas, termociklerio parametrai ar nespecifinis susiejimas su kitomis šablonų sekomis.
