Nėra PCR stiprinimo

1. Kodėl PGR nėra amplifikacijos??
2. Kodėl mano DNR nepadidėjo??
3. Kas atsitiks, jei pradmenys nebus pridedami prie PGR?
4. Kaip pataisyti nespecifinį PCR amplifikaciją??

Kodėl PGR nėra amplifikacijos??

Jei pradinis šablono kiekis yra per mažas, gali padidėti nepakankamai. Padidinkite stiprinimo ciklų skaičių 5 žingsniais arba, jei įmanoma, padidinkite šablono kiekį. Teršalai dNTP mišinyje gali sukelti nepilną ar neteisingą amplifikaciją arba PGR slopinimą. Naudokite aukštos kokybės dNTP.

Kodėl mano DNR nepadidėjo??

1) gali būti blogas pradmenų dizainas arba reakcijos standartizavimas (Taigi, įvertinkite savo pradmenų dizainą ir atlikite, kaip kiti jau sakė, gradiento PGR, kad įvertintumėte skirtingas atkaitinimo tempas); 2) Nėra DNR (jūsų ekstrahavimo protokolas gali būti nepavykęs), todėl jūsų pradmenys gali tik susilieti vienas su kitu (arba amog).

Kas atsitiks, jei pradmenys nebus pridedami prie PGR?

Klausimas: Jei pamiršote pridėti pradmenų prie savo PGR reakcijos, kas atsitiks ir kodėl? 1. Jūsų reakcija nepavyks, nes Taq polimerazė negali pridėti bazių be mažo DNR gabalo. ... Jūsų reakcija nepavyks, nes nebūtų fermento, galinčio pridėti naujų nukleotidų bazių.

Kaip pataisyti nespecifinį PCR amplifikaciją??

Naudokite mažiau ciklų, kai šablono koncentracija yra didelė, ir naudokite daugiau ciklų, kai šablono koncentracija yra maža. 2. Pratęsimo laikas buvo per ilgas: per ilgas pratęsimo laikas gali leisti nespecifinį stiprinimą. Paprastai naudokite pratęsimo laiką 1 min/kb.