Topmusicanswers
Sureguliuokite atkaitinimo temperatūrą, nes didelė PGR priedų ar pagalbinių tirpiklių koncentracija silpnina pradmenų surišimą su tikslu. Padidinkite DNR polimerazės kiekį arba naudokite didelio našumo DNR polimerazes.
...
- Sekos klaidos PGR produktų galuose.
- Klaidingai teigiamas stiprinimas.
- Ištekliai.
- Kokie yra dažniausiai pasitaikantys trikčių šalinimo būdai, atliekami atliekant PGR?
- Kodėl mano PGR neveikia??
- Kas sukelia PGR tepimą?
- Kas atsitiks, jei atkaitinimo temperatūra yra per aukšta?
Kokie yra dažniausiai pasitaikantys trikčių šalinimo būdai, atliekami atliekant PGR?
PCR trikčių šalinimo vadovas
| Problema | Priežastys |
|---|---|
| Mažas PGR derlius arba jo visai nėra | „Thermocycler“ programos atkaitinimas ir pratęsimo temperatūra nėra optimali |
| Reakcijai trūksta Taq polimerazės ar kito reakcijos komponento | |
| Grunto koncentracija per maža | |
| Tikslinė seka nėra DNR šablone |
Kodėl mano PGR neveikia??
Pamiršus tik vieną PGR reakcijos komponentą, nesvarbu, ar tai būtų DNR polimerazė, pradmenys ar net šablono DNR, reakcija bus nesėkminga. Paprasčiausias sprendimas yra pakartoti reakciją. ... Jei po to vis dar nėra PGR produkto, yra tikimybė, kad jūsų reakcijai trukdo dar kažkas.
Kas sukelia PGR tepimą?
DNR užterštumas, RNR DNR mėginyje, aukšta DNR koncentracija PGR reakcijoje gali sukelti tepimą. ... DNR tepimas paprastai atsiranda augaluose dėl didelės šablono DNR koncentracijos.
Kas atsitiks, jei atkaitinimo temperatūra yra per aukšta?
Atkaitinimo temperatūra buvo per aukšta
Jei atkaitinimo temperatūra yra per aukšta, gruntai negali prisijungti prie šablono. Nykščio taisyklė - naudoti atkaitinimo temperatūrą, kuri yra 5 ° C žemesnė nei Tm iš grunto.
