„Takara pcr“ trikčių šalinimas

Vietoj to reikės optimizuoti PGR sąlygas; koreguodami PGR sąlygas, atsižvelkite į šiuos dalykus:

1. Sumažinkite šablono kiekį.
2. Padidinkite atkaitinimo temperatūrą.
3. Naudokite prisilietimo PGR.
4. Sumažinkite PGR ciklų skaičių.
5. Iš naujo suprojektuokite gruntus.
6. Naudokite įdėtus gruntus.
7. Iš naujo sustiprinkite gaminį.

1. Kodėl mano PGR neveikia??
2. Kaip optimizuoti PGR sąlygas??
3. Kas sukelia tepimą PGR?
4. Kaip žinoti, ar PGR yra užterštas??

Kodėl mano PGR neveikia??

Pamiršus tik vieną PGR reakcijos komponentą, nesvarbu, ar tai būtų DNR polimerazė, pradmenys ar net šablono DNR, reakcija bus nesėkminga. Paprasčiausias sprendimas yra pakartoti reakciją. ... Jei po to vis dar nėra PGR produkto, yra tikimybė, kad jūsų reakcijai trukdo dar kažkas.

Kaip optimizuoti PGR sąlygas??

PGR sąlygos

1. Naudokite aukštesnę denatūracijos temperatūrą (pvz.g., 98 ° C, o ne 94 ° C arba 95 ° C), kad šablonas būtų visiškai denatūruotas.
2. Laikykite kuo trumpesnį GC turinčių šablonų atkaitinimo laiką.
3. Naudokite gruntus su didesniu T_m (>68 ° C), nes atkaitinimas gali įvykti aukštesnėje temperatūroje.

Kas sukelia tepimą PGR?

DNR užterštumas, RNR DNR mėginyje, aukšta DNR koncentracija PGR reakcijoje gali sukelti tepimą. ... DNR tepimas dažniausiai atsiranda augaluose dėl didelės šablono DNR koncentracijos.

Kaip žinoti, ar PGR yra užterštas??

Norėdami patikrinti, ar tirpalas nėra užterštas, surinkite neigiamas kontrolės reakcijas naudodami naujus reagentus, kurie, kaip žinoma, nėra užteršti, ir į kiekvieną reakciją įpilkite vieną iš įtariamų tirpalų. Ši reakcija rodo, kad sustiprinti produktai, rodantys užteršimą, yra įrodymas, kad pridėtas tirpalas buvo užterštas.